تبلیغات
Lab 87
Lab 87
 
قالب وبلاگ
نظر سنجی
نظر شما؟





 
موارد استفاده EDTA بعنوان ماده ضدانعقاد

مقدمه
نمكهای Ethylenediaminetetra-acetic.Acid (EDTA) به علت حفظ سلولهای خونی بعنوان ماده ضد انعقاد مناسب در آزمایشگاههای هماتولوژی بكار می رود. این ماده توانایی پیوند با تعدادی از عناصر را داشته و با اتصال به كلسیم می تواند آنرا از محیط خارج نماید. كلسیم و دیگر یونهای دوظرفیتی می توانند بعنوان كوفاكتورهای آنزیم عمل نمایند و بهمین دلیل نمكهای EDTA جهت تعیین مقدار كلسیم، آهن، آلكالن فسفاتاز، كراتین كیناز و لوسین آمینو پپتید از مناسب نیستند.
موارد استفاده
EDTA جهت آزمایشات زیر در هماتولوژی توصیه می گردد.
1 – هماتوكریت (روش میكروهماكریت) – شمارش پلاكت – شمارش گلبولهای سرخ و سفید اندازه گیری هموگلوبین – گسترش خون محیطی جهت افتراق سلولی – شمارش رتیكولوسیت – فلوسیتومتری – سدیمانتاسیون (پس از تصحیح باسیترات سدیم). نمونه خون تهیه شده با ضد انعقاد EDTA در مدت 6 ساعت در حرارت آزمایشگاه باید از آزمایش گردد. استفاده از EDTA در سایر موارد مثل اندازه گیری سیكلوسپورین (Cyclosporin) و عناصر بسیار كمیاب توصیه شده است. لازم به ذكر است كه نمكهای EDTA می توانند با ظروف فلزی یا درب آنها واكنش نشان داده و یونهای فلزی را آزاد كنند بنابراین برای استفاده از EDTA باید از ظروف مناسبی استفاده شود.

انواع EDTA
EDTA به صورت اسید آزاد به تنهائی بعنوان ضد انعقاد مصرف نمی گردد. بیشتر نمكهای آن مورد استفاده قرار می گیرد. اسید آزاد آن دارای وزن ملكولی 2/292 و به صورت پودر سفید بدون بو می باشد. محلول اشباع آن (در 20 درجه سانتیگراد) 2000 تا 300 میلی گرم در لیتر است.
EDTA دی سدیك به همراه دو ملكول آب (EDTA-NA2, 2H2O) دارای وزن ملكولی 2/372 و به صورت پودر كریستال بدون بو می باشد. حلالیت آن در حرارت 20 درجه سانتیگراد است.
EDTA دی پتاسیك به همراه دو ملكول آب (EDTA-K2, 2H2O) دارای وزن ملكولی 4/404 می باشد. این نوع بیشتر در اروپاو ژاپن استفاده می شود و به تازگی در آمریكا مورد توجه قرار گرفته است. این نمك نسبت به نمكهای دی سدیك از حلالیت بیشتری برخوردار است.
EDTA تری پتاسیك (EDTA-K3) دارای وزن ملكولی 406 و بصورت مایعی شفاف، بدون بو می باشد، نوع خشك شده آن به صورت پودر سفید بدون بو است.

PH نمكها
PH نمكهای تری پتاسیك نزدیك به PH خون (8-7) می باشد، این مقدار بالاتر از PH نمكهای دی سدیك (3/5–5/4) است، در تستهای خاصی كه بستگی به شرایط اسیدی یا قلیائی دارند می توان با توجه به PH مورد لزوم EDTA مناسب را بكار برد. در PH كمتر از چهار، كمپلكس متصل به كلسیم پایدار نبوده و ممكن است تجزیه و جدا گردد.

خواص ضد انعقاد
بطور كلی EDTA بعنوان یك ماده ضد انعقاد در تستهای انعقادی بكار نمی رود مگر هنگامیكه بررسی و آزمایش پلاكت مورد نظر باشد. باید توجه نمود كه در بعضی بیماران بعلت وجود آنتی بادیهای پلاكتی، با وجود EDTA پلاكتها به صورت چسبیده به یكدیگر مشاهده می شوند، لذا در این موارد نباید EDTA مصرف گردد. در ضمن قابل ذكر است كه فاكتور V در مقابل EDTA ناپایدار است.

مقادیر لازم
میزان مصرف EDTA-K3 ، 2/1 میلی گرم برای هر میلی لیتر خون است ولی EDTA دی پتاسیك و دی سدیك همراه با دو ملكول آب 25/0 ± 5/1 میلی گرم برای هر میلی لیتر خون مورد استفاده قرار می گیرد.

پایداری نمونه
در حرارت آزمایشگاه بیشتر از 6 ساعت از زمان گرفتن خون در لوله حاوی EDTA نباید بگذرد ولی در حرارت 4 درجه سانتیگراد (یخچال) تا 24 ساعت P.C.V, Hb, W.B.C, R.B.C, MCV, Platelet پایدار است.
مقدار EDTA مصرفی باید متناسب با مقدار خون باشد و اگر EDTA بیشتر از اندازه مصرف گردد گلبولهای سرخ و سفید چروكیده و منهدم می گردند كه این به علت افزایش غلظت یونی می باشد. افزایش EDTA بیش از 2 میلی گرم در میلی لیتر سبب كاهش قابل توجهی در P.C.V و در نتیجه افزایش MCHC می شود و نیز همین افزایش بر روی پلاكتها اثر گذاشته و سبب تورم و پاشیدگی آنها می شود، شمارش مجدد این ذرات پلاكنی سبب افزایش غیرواقعی تعداد پلاكتها می گردد. كاهش میزان EDTA باعث ایجاد لخته های ریز گردیده كه تاثیر قابل توجهی در اندازه گیری پلاكتها می گذارند.

تاثیر ماده ضد انعقاد روی انگل مالاریا
بهترین روش برای تشخیص انگل مالاریا استفاده از گسترش بدون ماده ضد انعقاد است كه بطور مستقیم از خون مویرگی و یا وریدی تهیه شده باشد. ولی چون برخی از نمونه ها از سایر مراكز ارسال می گردد و یا انگل بطور اتفاقی همراه با ماده ضد انعقاد دریافت می شود لازم است كه از اثرات ماده ضد انعقاد بر روی مالاریا اطلاع داشت.
كلیه مواد ضد انعقاد سبب تغییراتی در انگلهای مالاریا گردیده كه با توجه به چرخه زندگی انگل، فاصله طی شده تا انجام آزمایش و نوع ماده ضد انعقاد مورد مصرف متفاوت می باشد.
چنانچه استفاده از ماده ضد انعقاد الزامی است بهتر است هر چه سریعتر گسترش را تهیه نمود.
ماده ضد انعقاد انتخابی EDTA دی پتاسیك است، این ماده برای مدت كوتاهی تغییراتی در روی انگل بوجود نمی آورد ولی اگر بیش از 6 ساعت در مجاورت خون باشد سبب اختلالات زیر می گردد.
1 - مرحله تكامل جنسی سیر خود را ادامه خواهد داد و میكروگامتوسیت پس از بلوغ گامتوسیت را داخل خون آزاد می كند. این گامتها در تشخیص افتراقی با بورلیا قرار می گیرند.
گامتوسیتهای هلالی شكل پلاسمودیوم فالسیپارم بدور خود جمع شده شبیه پلاسمودیوم مالاریا می شوند.
2 – تروفوئیت بالغ پلاسمودیوم ویواكس در اثر تماس طولانی با EDTA بهم فشرده شده و اگر این زمان بیش از اندازه طولانی باشد گلبولهای سرخ حاوی گامتوسیت و شیزونت بالغ همراه انگل نابود میشوند ولی رنگدانه هموزین مالاریا همیشه پایدار است و می تواند برای یك فرد با تجربه كمكی در جهت یافتن و حتی تشخیص نوع انگل باشد.
3 – نمای گلبول سرخ با دندانه دار شدن و رویهم قرار گرفتن دیواره سلولی تغییر می كنند.
4 – گلبولهای سرخ منقوط (مبتلا به پلاسمودیوم ویواكس) قابل رویت نخواهد بود.
هر گاه نمونه برداری در اتر EDTA تغییرات قابل توجهی نشان دهد بهتر است نمونه گیری را تكرار نموده و در این صورت گسترش را به صورت مستقیم و بدون استفاده از ماده ضد انعقاد تهیه نمود.

تشخیص EDTA
روشهای متفاوتی جهت تشخیص انواع EDTA وجود دارد كه ساده ترین آن عبارتست از :
دو قطره از محلول تیوسیانات آلومینیوم (8 گرم درصد میلی لیتر آب مقطر) و دو قطره از محلول كلرور فریك (9 گرم درصد میلی لیتر آب مقطر) را به 5 میلی لیتر آب مقطر بدون یون در لوله آزمایش اضافه می كنیم محلول قرمز رنگی حاصل می شود. تقریباً در حدود 50 میلی گرم نمك مورد نظر را به محلول فوق اضافه كرده در صورت وجود EDTA ، رنگ قرمز تبدیل به زرد خواهد شد.


[ سه شنبه 10 آذر 1388 ] [ 02:12 ب.ظ ] [ روح الله مهدیان ]
.: Weblog Themes By Iran Skin :.

درباره وبلاگ

آمار سایت
بازدیدهای امروز : نفر
بازدیدهای دیروز : نفر
كل بازدیدها : نفر
بازدید این ماه : نفر
بازدید ماه قبل : نفر
تعداد نویسندگان : عدد
كل مطالب : عدد
آخرین بروز رسانی :
فروش بک لینک طراحی سایت